本实验基因分析证明，14例在原发灶显示的p53变异，在其相应的转移灶均被证实。另有5例在大肠癌原发灶未证实到p53变异的患者，在肝转移灶出现了p53变异，2例在原发灶已有p53变异的患者，在转移灶除观察到同样的变异外，还发现了新的变异。由此证明，p53变异主要开始于原发大肠癌灶，并保持于转移到肝脏的大肠癌细胞内，在转移过程中变异了的p53特性不变，只有极少数其变异的位点增多。在大肠癌未被发现而在肝脏转移灶出现的p53变异以及新增加的变异位点，提示p53改变也可能始发于转移癌灶。我们没有发现一例在原发灶发生的p53变异在癌转移灶内丢失。

　　通过DNA序列分析进一步发现，具有同一single base变异的病例，变异碱基峰与正常峰之比，在肝转移标本明显地高于相应的大肠癌标本。由于在提取DNA之前切片均经镜下确认，不论在大肠还是肝转移标本，瘤细胞含量均占总组织细胞90%以上，因此排除了大肠标本含有较多正常组织细胞的可能。以上结果应更多地被考虑为在转移灶变异p53基因含量或含有变异p53的癌细胞含量增加。后者将通过失去野生型p53在细胞周期中的负性调节作用促进癌细胞恶性增殖，这也许从分子基因角度解释了为什么转移后的肿瘤生长更快。本组标本3个p53变异热点分别在外显子8的248及273密码子，和外显子6的196密码子，与文献报道［1，2］相符。点变异主要表现为G∶C→A∶T的改变。

　　由表2可见，本研究有3例患者，在大肠癌灶可以观察到免疫组化显示的p53蛋白过度表达，却无法在DGGE和DNA序列分析中得到证实，但它们的转移灶均呈现p53变异和p53蛋白过度表达。其原因可能是变异的p53水平在大肠原发灶尚低。Beck等［7］曾报道，在DGGE检测中，如变异的基因含量少于10%，其变异条带就很难被肉眼观察到，含量极低的变异p53在DNA测序中也极易被正常碱基峰遮盖。这一结果还提示，尽管DGGE和DNA序列分析是十分先进的技术，但不能以此取代免疫组化方法。这不仅因为后者能够反映p53在蛋白水平的改变，还因为在某些时候，特别是变异的p53明显少于野生型时，免疫组化染色比DNA分析技术更加敏感。

　　此外，本研究中4例显示无义突变的基因改变，在免疫组化染色均为阴性。这是由于免疫组化检测到的表达增加是突变型p53表达增加，是由错义突变所致，而无义突变可使野生型p53失活，但不形成突变型p53，故不会导致表达增加，这说明单独使用免疫组化技术也可引起假阴性。免疫组化技术必须和基因检测技术结合使用。

　　志谢　瑞典哥德堡大学医学部外科Peter Naredi, Kent lundholm和Ann Forslund

　　本课题受Clinic Cancer Research Foundation in Sweden资助

　　参考文献

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