A：DGGE检测在p53外显子6发现变异；B：同一病例p53外显子6序列分析结果。B-Ⅰ：野生型p53对照；B-Ⅱ：大肠标本；B-Ⅲ：肝转移标本。在大肠及肝转移标本p53外显子6的密码子196的第一碱基呈现一致性C→T突变，T/C峰比值肝组(B-Ⅲ)＞肠组(B-Ⅱ)

　　图1　病例29的DGGE和DNA序列分析结果

　　序列分析曲线显示，在原发、转移灶同时有single base改变的14例中，13例p53变异峰和正常峰之比在肝脏转移灶高于大肠原发灶(图1，P＜0.001)。

　　2.p53免疫组化染色结果：34例中，17例呈原发灶和转移灶一致性的p53蛋白过度表达。p53免疫组化和DNA序列分析的结果高度一致(r=0.96，

　　P＜0.001)。在所有p53过度表达的肝转移标本，通过DGGE和序列分析，均可以证实到p53的变异，但在3例显示p53过度表达的肠癌原发灶，DGGE和序列分析无法证明有任何形式的p53变异。此外，4例(6处)序列分析显示无义突变者，其免疫组化均为阴性染色。

表2　大肠癌继发肝转移患者原发灶和转移灶p53基因突变及p53蛋白过度表达

序号	病例	部位	DGGE和自动测序检出的突变				p53蛋白表达
			外显子	密码子	碱基突变	氨基酸改变
1	例2	结肠	7	258	GAA→GtggAA	插入	+
		肝	7	258	GAA→GtggAA	插入	+
2	例3	结肠	7	245	GGC＞AGC	Gly＞Ser	+
		肝	7	245	GGC＞AGC	Gly＞Ser	+
3	例4	结肠	8	DGGE和自动测序均未发现突变			-
		肝	8	286	GAA→TAA	Glu→Stop	-
4	例5	结肠	9	DGGE和自动测序均未发现突变			-
		肝	9	326	GAA→TAA	Glu→Stop	-
5	例6	直肠	9	317	CAG→AAG	Gln→Lys	+
			5	DGGE和自动测序均未发现突变
		肝	9	317	CAG→AAG	Gln→Lys	+
			5	179	CAT→TAT	His→Tyr
6	例7	结肠	7	248	CGG→CAG	Arg→Gln	+
		肝	7	248	CGG→CAG	Arg→Gln	+
7	例8	结肠	8	DGGE和自动测序均未发现突变			+
		肝	8	273	CGT→TGT	Arg→Cys	+
8    GGTAAT→GGACAT	例9	结肠	8	262/263	GGTAAT→GGACAT		+
		肝	8	262/263	GGTAAT→GGACAT		+
9	例15	结肠	8	273	CGT→TGT	Arg→Cys	+
		肝	8	273	CGT→TGT	Arg→Cys	+
			8	280	AGA→AAA	Arg→Lys
10	例16	结肠	5	182	TGC→TGtC	插入	+
		肝	5	182	TGC→TGtC	插入	+
11	例19	结肠	8	278	CCT＞CTT	Pro＞Leu	+
		肝	8	278	CCT→CTT	Pro→Leu	+
12	例20	结肠	6	196	CGA→TGA	Arg＞stop	-
		肝	6	196	CGA→TGA	Arg→stop	-
13	例22	结肠	8	DGGE发现有突变，自动测序失败			+
		肝	8	DGGE发现有突变，自动测序失败			+
14	例24	结肠	8	273	CGT＞TGT	Arg＞Cys	+
		肝	8	273	CGT＞TGT	Arg＞Cys	+
15	例24	结肠	8	DGGE和自动测序均未发现突变			+
		肝	8	267	CGG→CAG	Arg→Leu	+
16	例25	直肠	8	DGGE和自动测序均未发现突变			+
		肝	8	285	GAG→AAG	Glu→Lys	+
17	例28	直肠	8	273	CGT→TGT	Arg→Cys	+
		肝	8	273	CGT→TGT	Arg→Cys	+
18	例29	直肠	6	196	CGA→TGA	Arg→Stop	-
		肝	6	196	CGA→TGA	Arg→Stop	-
19	例30	结肠	6	221	GAG→GAC	Glu→Asp	+
		肝	6	221	GAG→GAC	Glu→Asp	+
20	例31	结肠	7	248	CGG→CAG	Arg→Gln	+
		肝	7	248	CGG→CAG	Arg→Gln	+
21	例34	结肠	8	DGGE发现有突变，自动测序失败			+
		肝	8	DGGE发现有突变，自动测序失败			+

　　注：p53野生型者未列入表中

　　讨　论

　　关于p53基因和大肠癌发生、转移的关系，已有许多研究报道［1，5，6］，但均局限于原发灶和转移灶组与组间的比较。如果比较每一单一个体的大肠癌原发灶和肝转移灶，就有可能证实大肠癌继发肝转移者，p53变异是否主要首发于肠肿瘤原发灶，并确切了解在癌细胞转移过程中，细胞内野生的或已变异的p53是否发生变化及其意义。

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