3、PCR-SSCP法检测hMSH2基因突变　PCR反应体系和PCR反应参数同前。PCR产物用8%中性聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳结束后进行银染。

　　4、序列分析证实PCR-SSCP法检测结果　用PGEM-T质粒载体将PCR产物进行克隆(TA克隆)，然后以M13为引物用自动序列分析仪测序。

　　结果

　　1、MI和LOH发生率　60例标本中，20例(33.33%)表现微卫星不稳定性，RER阳性11例(18.33%)，在14例(23.3%)中检测到LOH。六个位点中，微卫星不稳定性发生率依次为：D3S1293 18%(11/60)，D2S123 13%(8/60)，D8S282 13%(8/60)，D18S58 12%(7/60)，D2S119 12%(7/60)，D13S160 7%(4/60)；LOH发生率依次为：D2S123 10%(6/60)，D18S58 8%(5/60)，D3S1293 7%(4/60)，D8S282 7%(4/60)，仅1例在D2S119位点有LOH，D13S160未检测到LOH。

　　2、RER阳性大肠癌的临床和病理特征　60例大肠癌中，发现RER阳性11例，年龄32～78岁，平均52岁；RER阴性49例，年龄34～78岁，平均57岁，RER阳性组比RER阴性组平均发病年龄小(P=0.18)。6例40岁以下的大肠癌中，RER阳性占3例(50%)；54例40岁以上的病例中，RER阳性8例(14.8%，P＜0.05)。11例RER阳性大肠癌中，4例一级亲属有恶性肿瘤病史，49例RER阴性病例中，也有4例一级亲属有恶性肿瘤病史，RER阳性病例有恶性肿瘤家族史的比例明显高于RER阴性(8.2%，P＜0.05)。11例RER阳性病例中，1例曾患大肠癌，而RER阴性无1例有恶性肿瘤病史。1例RER阳性病例为多原发性大肠癌，升结肠内同时有两个肿瘤，均为RER阳性，RER阴性病例无多原发癌患者。RER阳性大肠癌与RER阴性大肠癌比较，在肿瘤部位、生长方式、Dukes分期等方面有一些差别，但无统计学意义。

　　3、肿瘤组织hMSH2基因突变　在20例微卫星不稳定性大肠癌中检测hMSH2基因5、7、8、12、13、15外显子突变，发现8例在第5外显子存在杂合型突变，其中1例在第7外显子发现另一突变，相应粘膜未发现突变条带，因此，该突变为体细胞性突变。

　　4、序列分析　将PCR-SSCP检测有突变、可疑突变和正常的标本各一对，再次PCR扩增，扩增产物克隆后序列分析，证实5号标本肿瘤组织在410号密码子T→C置换，5号标本正常粘膜无这种改变，可疑突变和无突变者也无这种改变。

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