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材料与方法
实验所用的主要试剂有:DTPA环二酸酐(c.DTPA)、三氧化二钆(Gd2O3,纯度99.99%)、钆喷酸葡胺注射液(Gd-DTPA)、CL-3单克隆抗体。细胞及动物有:LS-174T人大肠癌细胞、10周龄BALB/c裸鼠9只。主要设备有: Bruker/Spectrospin公司生产的Tomikon-BMT-1100型MRI扫描仪,最大场强为0.282T,MR-600型酶联检测仪,MPS-2000型紫外分光光度计。
肿瘤模型的建立:给每只BALB/c裸鼠背部皮下注射LS-174T人大肠癌细胞5×106个,20天后肿瘤直径为1cm左右。
将CL-3单克隆抗体用离心超滤法更换成不同pH值的0.1N的NaHCO3介质,加入适量c.DTAP(浓度为0.4mg/ml),混匀后在室温下放置5分钟,偶联反应即告完成。在偶联过程中,c.DTAP一部分与抗体发生偶联反应,另一部分水解为游离的DTPA,与抗体发生偶联反应的c.DTAP占总投入量的百分数叫偶联率。用离心超滤法除去体系中的游离DTPA,并更换成pH 5.6,0.1N醋酸(HAc)介质,再加入GdAc3,反应后除去未结合的Gd。
MRI扫描:选用人膝关节线圈,每只荷瘤裸鼠均作平扫、Gd-DTPA增强扫描、注射Gd-DTPA-McAb后20小时扫描。均作T1加权横断面及肿瘤最大斜切面成像。TR 500毫秒,TE 34毫秒,矩阵256×256,成像野180mm×180mm。造影剂剂量分别是:Gd-DTPA 5μl含Gd 0.5mg,Gd-DTPA-McAb 0.3ml含Gd 0.04mg、McAb 3mg。
统计学处理:方差分析及其两两比较。
结果
一、c.DTPA与抗体偶联的最佳条件
pH为8.0,C/P(c.DTPA与抗体的摩尔比)=1,抗体浓度为10mg/ml时c.DTPA 与抗体的偶联率最高,达68.2%。CL-3单克隆抗体的免疫学活性因DTPA 的偶联而有降低,但幅度不大。CL-3单克隆抗体偶联DTPA前后的免疫学活性见表1。
二、Gd-DTPA-McAb及Gd-DTPA对肿瘤组织的增强效果的比较
1. 肿瘤组织增强前(简称A组)、Gd-DTPA增强后(简称B组)及Gd-DTPA-McAb增强后(简称C组)的T1加权像(T1WI)的信号强度见表2。
方差分析结果:F=68.9,P<0.01,Student-Newman-Keuls检验表明,三组间两两均有显著性差异(A组与B组Q=16.75,B组与C组Q=8.42,A组与C组Q=8.33, P均<0.01)。表明Gd-DTPA、Gd-DTPA-McAb对肿瘤组织均有明显的强化作用,Gd-DTPA的强化程度比Gd-DTPA-McAb 的强化程度更为显著。
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