1.5　微量全血培养

　　方法1： 将含有肝素抗凝剂的受检者全血以终点稀释在24孔板上（每孔量分别为1000， 500， 250， 125， 62.5，10 μl），加入激活了的正常人的PBMC 106进行复孔培养，每孔加入淋巴细胞生长液，使总量为2 ml，置5%CO2、37℃温箱中培养。

　　方法2： 将含有肝素抗凝剂的受检者全血以终点稀释在24孔板上（每孔量分别为1000，500，250，125，62.5，10 μl），加入新鲜的未经PHA-P激活的正常人PBMC 1×106进行复孔培养，每孔加入RPMI-1640刺激培养基，使总量为2 ml。刺激培养3 d后，复孔中1孔收集离心，弃上清，沉淀物用淋巴细胞生长液悬浮，培养在另一24孔板中（即其中不含PHA-P），另1孔不收集离心，按常规用淋巴细胞生长液换液（即其中含有少量的PHA-P）。

　　以上两种方法的全血培养每隔3～4 d移去1 ml培养上清液，随之补充1 ml新鲜的生长液，其中在第7、14、21天还需补充106新鲜的激活了的正常人PBMC，共培养28 d。每次所移去的培养液均须保留以便检测其P24抗原的含量。

　　1.6　P24抗原检测及结果判断　P24抗原试剂盒为Organon Teknika公司生产的Vironostika HIV-1 Antigen Microelisa System试剂盒，批号99101806；酶标仪Bio-Rad 550型。操作步骤严格按说明书进行。每3 d进行一次P24抗原检测。

　　阳性结果判断：在整个培养过程中首次出现阳性的样本，其P24抗原值必须大于30 pg/ml，若紧接着的下一个取样标本也是阳性而且其P24抗原值比前一个样本值高4倍以上，则可以肯定受检者的血液标本为艾滋病病毒阳性。培养过程中，连续两次取样（即间隔3～4 d）均呈现P24抗原阳性，且OD值大于3.0，即可终止培养。若培养的全过程至第28天均为阴性，则在第28天或32天终止培养。

　　2　结果

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