| 近年来艾滋病已在全国范围内迅速蔓延开来，其主要传播途径为经静脉共用注射器吸毒为主的经血传播和性接触传播，1995年在云南省首次发现经母婴垂直传播的小儿HIV感染者［1］。随着育龄妇女HIV感染者的增多，通过母婴途径传播的儿童HIV感染率上升。由于母体被动IgG抗体存在的缘故，不能使用血清学诊断方法对2岁内的小儿进行HIV抗体检测，此外，用经典方法抽取大量的血液进行HIV病毒分离确认儿童感染有一定的难度。因此开展微量全血HIV分离培养技术用于小儿HIV可疑感染者的快速早期诊断以及病原学研究等势在必行，我们对微量全血HIV分离培养技术进行了研究，现将结果报告如下。
1 研究对象及方法
1.1 研究对象 经本室确认的4例HIV抗体阳性者，男女各2名，年龄在23～60岁。根据我国HIV/AIDS诊断标准（国家标准1995），其中1例为艾滋病病人，其余3例为无症状HIV感染者。
1.2 标本采集 无菌操作抽取静脉血15 ml，注入含肝素抗凝剂的无菌试管中（其肝素钠含量为10～20 IU/ml）。血样在取血6 h内进行共培养。
1.3 正常人淋巴细胞（PBMC）的制备 按常规抽取正常人（艾滋病抗体检测阴性，无其它传染病者）静脉血，肝素抗凝，1000 r/min离心，吸出血浆，血细胞用Hanks液稀释至原体积的3倍，用Ficoll-Hypaque液分离并收集PBMC，Hanks液洗2次，然后悬浮在RPMI 1640刺激培养基中（其中每毫升培养液中含有10%热灭活胎牛血清、青霉素100 IU、链霉素100 μg、IL-2 100 IU、谷氨酰胺2 mmol、PHA-P 5 μg 及Polybrene 5 μg），调整细胞数为2×106/ml。在5%CO2、37℃温箱中培养48～72 h，即为活化的PBMC，或与病人全血进行同时刺激共培养。
1.4 常规共培养 用上述方法分离出病人的PBMC，1×107感染者PBMC与5×106活化了的健康供者PBMC共同培养在15 ml的淋巴细胞生长液中（其中每毫升生长液中含有10%热灭活胎牛血清、青霉素100 IU、链霉素100 μg、IL-2 100单位、谷氨酰胺2 mmol、神经氨酸酶0.003 [1] [2] [3] [4] 下一页 2005-8-29 16:24:19文章来自中健网13407疾病频道2005-8-29 16:24:19
作者：佚名
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