| 下限。
1.4.3 初步应用 采用上述建立的方法检测HIV抗体阳性血清标本24份, 根据标准曲线判定p24抗原的含量。
2 结 果
2.1 分泌抗p24 McAb杂交瘤细胞株的建立 采用淋巴细胞杂交瘤技术建立了5株分泌抗HIV p24特异性McAb的杂交瘤细胞株, 分别命名为D3, 1H1, 2G10, 3H5和4H6。 体外连续传代培养3月以上及冻存复苏后, 仍保持持续稳定分泌特异性McAb的能力。 腹腔注射杂交瘤细胞7 d后开始收获腹水, 腹水及培养上清McAb的效价, 以及IgG亚类、 轻链类型的测定结果见表1。
表1 抗p24 McAb的Ig亚类及效价测定
Tab 1 Ig subclasses and titers of five McAbs to HIV p24
2.2 McAb的特性鉴定
2.2.1 特异性鉴定 Western blotting的结果表明, 5株McAb可与重组p24抗原发生特异性反应(图1)。 间接ELISA结果显示, 5株McAb与HBcAg, HCV C区, NS-3区, 以及大肠杆菌蛋白均不发生交叉反应。 但这5株McAb不但与pG1而且与p24均可发生较强的反应, 只有2G10和3H5两株McAb与pG2有较强的反应。 表明这5株McAb均可特异性地识别HIV p24分子上的抗原表位, 而不是针对pG1分子两端p15, p17,以及载体部分氨基酸序列上的抗原表位的。 2G10和3H5识别的表位位于p24蛋白C端151个氨基酸序列之上; D3, 1H1和3H5识别的表位位于N端的80个氨基酸上。
2.2.2 作用表位的鉴定 竞争抑制法结果表明, 5株McAb共识别3个不同的表位: D3, 1H1和4H6识别同一表位; 2G10和3H5分别识别两个不同的表位(图2,见第Ⅴ页)。 上述结论与5株McAb同pG1, pG2和p24反应的结果相符合。
图1 5株McAb特异性识别重组p24的Western blotting结果
Fig 1 Western blotting results of recombinant HIV p24 specifically 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页 2005-8-29 16:16:07文章来自中健网13404疾病频道2005-8-29 16:16:07
作者：佚名
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