| 刘荷中 凌世淦 陈 坤 宋晓国 韩保光 孟 莉 马贤凯
(军事医学科学院基础医学研究所, 北京 100850)
董邦权 金伯泉
(第四军医大学免疫学教研室, 西安 710032)
获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)是由人免疫缺陷病毒(HIV)感染而引起的一种严重的恶性传染病, 它主要经输血或血液制品传播。 目前全球有2 000余万HIV携带者, 我国HIV感染者已从1993年底的约1万人上升至1995年底的10万人左右, 而且还有进一步蔓延的危险。 因此, HIV感染检测方法的建立、 发展与完善在我国有着特殊重要的意义, 日益受到国家的重视。
本研究室在应用原核表达体系成功地表达HIV穿膜蛋白gp41, 核心抗原pG1和p24等一系列重组抗原的基础上［1, 2］, 以pG1免疫Balb/c小鼠制备出5株可特异性识别HIV p24的McAb, 并利用其中两株作用于不同抗原表位的McAb, 建立了检测HIV p24的夹心ELISA法, 对其临床应用进行了初步探讨。
1 材料和方法
1.1 抗原、 细胞系及实验动物 重组抗原pG1, pG2及p24由本室韩保光博士提供。 pG1包含有p24氨基酸序列全长(231个氨基酸)以及p17的13个氨基酸和p15的74个氨基酸; 而pG2则仅由p24 C-端的151个氨基酸, p15 N-端的74个氨基酸组成, 与pG1相比其不含p17序列, 并缺失了p24 N-端的77个氨基酸［２］。 pG1与pG2都在N端与C端分别融合了载体上的12与22个氨基酸。 小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0由本所陈勇老师惠赠; 8周龄雌性Balb/c小鼠购自本院实验动物中心。
1.2 杂交瘤细胞株的建立及腹水制备 取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0细胞以50%PEG促融。 培养至第10 d以间接ELISA法筛选阳性孔, 有限稀释法克隆化3次至克隆生长孔100%阳性建株。 Balb/c小鼠腹腔注射液体石蜡(0.5 ml/鼠), 10 d后腹腔注射杂交瘤细胞1×106个/鼠制备腹水。
1.3 McAb的特性鉴定
1.3.1 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页 2005-8-29 16:16:07文章来自中健网13404疾病频道2005-8-29 16:16:07
作者：佚名
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